Nuo mėginio iki ataskaitos: kaulų čiulpų biopsijos ir tikslios diagnostikos laboratorinė kelionė

Nuo mėginio iki ataskaitos: kaulų čiulpų biopsijos ir tikslios diagnostikos laboratorinė kelionė

Klausimų ir atsakymų metodas

Ištraukus 1,5 cm kaulų čiulpų audinio šerdį, kaip ji patiria daugybę sudėtingų „transformacijų“, kad galiausiai taptų mikroskopo stikleliu, nustatančiu diagnozę? Kaip kiekvienas laboratorinio apdorojimo etapas turi įtakos galutinei diagnostikos kokybei, pradedant fiksavimu ir nukalkinimu, baigiant pjūviais ir dažymu? Šios kelionės „užkulisių“ supratimas yra būtina sąlyga, kad gydytojai galėtų teisingai interpretuoti biopsijos ataskaitas.

Istorinė evoliucija

Laboratorinė kaulų čiulpų biopsijos apdorojimo technologija buvo nuolatinio „ištikimumo“ ir „aiškumo“ siekimo istorija. Ankstyvieji metodai naudojo formalino fiksavimą ir azoto rūgšties nukalkinimą, todėl audinys dažnai buvo per kietas arba prastai nudažytas. 1960-aisiais pradėjus taikyti etilendiaminotetraacto rūgšties (EDTA) kalcifikaciją, ląstelių morfologija ir antigeniškumas buvo išsaugotos geriau. Aštuntojo dešimtmečio plastiko (metilmetakrilato) įterpimo technologija leidžia nupjauti 2–3 μm plonas pjūvius, puikiai atvaizduojančias ląstelių detales. Dešimtajame dešimtmetyje imunohistochemija buvo sėkmingai pritaikyta kaulų čiulpų parafino sekcijoms, leidžiančioms vienu metu lokalizuoti ląstelių tipus ir antigenus. Šiandien automatizuotas dažymas ir skaitmeninis nuskaitymas standartizuoja darbo eigą ir įvertina rezultatus.

Standartinė darbo eiga: devynių pagrindinių žingsnių kokybės kontrolės taškai

1 veiksmas: audinių fiksavimas

Paskirtis:Nedelsdami nutraukite autolizę ir išsaugokite morfologiją.

Standartas:​ 10% neutralaus buferinio formalino; audinio-ir-fiksatoriaus tūrio santykis Didesnis arba lygus 1:10.

Laikas:Pataisykite 6–48 valandas. Po-fiksacijos audiniai lieka minkšti; Dėl per-fiksavimo jis tampa trapus, o tai turi įtakos pjūviams.

2 veiksmas: nukalkinimas

Būtinybė:kauluose yra kalcio; jo negalima pjaustyti be kalkių pašalinimo.

Aukso standartas:10 % EDTA tirpalas (pH 7,4), lėtas kalkių šalinimas 3–7 dienas.

Kontraindikacija:Venkite stiprių rūgščių (pvz., azoto rūgšties), kad greitai nukalkintumėte, nes jos labai pažeidžia ląstelių morfologiją ir antigenus.

3 veiksmas: audinių apdorojimas

Procesas:Dehidratacija, valymas ir infiltracija parafinu pakeičia vandenį audiniuose vašku.

Automatika:Automatiniai audinių procesoriai užtikrina, kad kiekviename bloke būtų identiški alkoholio, ksileno ir parafino vonios gradientai.

4 veiksmas: įterpimas

Pagrindinis taškas:Orientuokite apdorotą audinį išlydytame parafine, kad jis atvėstų ir sukietėtų. Labai svarbu įterpti audinį išilgai, kad būtų gautas visas skerspjūvis-nuo kaulo žievės iki meduliarinės ertmės.

5 veiksmas: skirstymas

Techniniai reikalavimai:Specializuotu kieto{0}audinio mikrotomo peiliu pjaustykite ištisinius, vienodo storio 3–4 μm griežinėlius. Atlikus visą biopsiją, paprastai duodama 20–30 atsarginių stiklelių („baltųjų stiklelių“) atsarginėms kopijoms.

6 veiksmas: plūduriavimas ir kepimas

Paskirtis:Vaško juostelės išlyginimas ir priklijavimas prie stiklelių, tada džiovinimas.

Temperatūra:Kepkite 60 laipsnių temperatūroje 1–2 valandas, kad audinys tvirtai sukibtų ir neatsiskirtų dažymo metu.

7 žingsnis: dažymas

Įprastinis skydelis:

H&E dėmės:Įvertina bendrą struktūrą, ląstelių morfologiją ir ląsteliškumą.

Retikulino dėmė (pvz., Gomori sidabrinė dėmė):Kaulų čiulpų fibrozės laipsnis (nuo MF-0 iki MF-3).

Prūsijos mėlyna geležies dėmė:Įvertina geležies kaupimąsi makrofaguose, kad nustatytų trūkumą ar perkrovą.

8 veiksmas: padengimas ir ženklinimas

Užbaigimas:Tvirtinamas su neutraliu balzamu ir dengiamuoju stikleliu visam laikui išsaugoti. Aiškiai pažymėkite paciento informaciją ir dėmės tipą.

9 veiksmas: patologinė apžvalga ir ataskaitų teikimas

Sisteminė apžvalga:​Patologai maža galia „nuskaito“ visą skyrių, kad nustatytų struktūrą, tada stebi ląstelių detales esant vidutinei -ar -didelei galiai.

Pranešti apie esminius dalykus:Turi būti įtrauktas kaulų čiulpų ląstelių skaičius, mieloidų / eritroidų / megakariocitų santykis ir morfologija, nenormalių infiltratų buvimas, retikulino fibrozės laipsnis ir geležies atsargos.

Specialūs metodai ir taikymas

Imunohistochemija (IHC):Specifinių antigenų (pvz., CD34, CD117, CD3, CD20) žymėjimas parafino pjūviuose, siekiant atskirti ūminės leukemijos imunotipus, limfomos infiltraciją ir minimalią liekamąją ligą.

Molekulinė patologija:DNR / RNR išskyrimas iš parafino blokų fluorescencijaiSituHibridizacija (FISH), PGR arba naujos{0} kartos sekos nustatymas (NGS), kad būtų atlikta morfologijos ir genų koreliacinė analizė.

Klaidų šaltiniai ir kokybės kontrolė

Išankstinė-analitinė klaida:​ Mėginys per mažas arba susmulkintas{0}}griežtai vykdykite veiklos standartus.

Taisymo klaida:​ Pavėluota arba netinkama fiksacija{0}}laboratorija turi nedelsdama priimti ir apdoroti mėginius.

Techninė klaida:​Per storos sekcijos arba prastai nudažomos-vidinės kokybės kontrolė (IQC) ir išorinis kokybės vertinimas (EQA).

Interpretacijos klaida:​ Patirties trūkumas arba nenuoseklūs kriterijai{0}}dviguba-akla peržiūra ir specialus mokymas.

Ateitis: skaitmeninimas ir žvalgyba

Visos skaidrės skaitmeninis nuskaitymas:​ Skaidrių konvertavimas į didelės raiškos{0}}skaitmeninius vaizdus, ​​kad būtų lengva saugoti, perduoti ir konsultuotis telefonu.

AI-Pagalbinė diagnostika:Algoritmai gali automatiškai kiekybiškai įvertinti ląstelių skaičių, ląstelių tankį ir fibrozės sritį, pateikdami objektyvius, pakartojamus duomenis, padedančius patologams pagerinti diagnostikos nuoseklumą ir efektyvumą.

Išvada

Kaulų čiulpų audinio šerdies kelionė per laboratoriją yra kruopštus „informacijos dekodavimo“ procesas. Kiekvieno žingsnio griežtumas yra tiesiogiai susijęs su galutinės diagnozės tikslumu. Suprasdami meistriškumą „užkulisiuose“, gydytojai gali geriau suvokti prieš juos pateikto patologijos pranešimo svorį, užmegzti veiksmingesnį dialogą su patologais ir kartu priimti tiksliausius sprendimus už pacientą.